SC∕T 7232-2020 虾肝肠胞虫病诊断规程(水产)
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ID： |
C79CE661B9F04016BD701680888FC8AA |
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文件大小(MB)： |
0.54 |
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页数： |
13 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-25 |
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ICS 65.020.30,B 41,←:斗时,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7232一2020,虾肝肠胞虫病诊断规程,Code of d.iagnosis for Enterocytozoon hepatopenaei d.isease,2020-08-26 发布2021 - 01 - 01 实施,J\: 气中华人民共和国农业农村部发布,SC/T 7232-2020,本标准由全国水产标准化技术委员会CSAC/TC 1 56) 归口,本标准起草单位.天津市水生动物疫病预防控制中心、中国水产科学研究院黄海水产研究所,本标准主要起草人: 耿绪云、刘群、王辛辛、韩进同IJ 、赵良炜、徐赞霞、梁艳,I,SC/T 7232-2020,虾肝肠胞虫病诊断规程,范围,本标准给出了虾肝肠胞虫病(Enterocytozoon hepato户enaei di sease)诊断试剂和材料、器材和l设备、临,床症状，规定了采样、组织病理、套式PCR 和TaqMan 荧光定盘PCR 等病原检验的3 种方法和综合判定,本标准适用于虾,-PR 叩U 牛队BHCVSαr,EEFFSTT,2,下列λ什λ、,凡是不注日期的引,GB/T 28630,SN/ T 1193,3 缩赂语,4,4.1 当纯度的水,4.2 12 中第3 章的规定,执行,4. 3 元水乙蹲分析纯,4.4 10XPCR 缓冲液:随Taq,4. 5 MgCl2 (25 mmo l/ U ， 一20'C保存,4.6 dN TPs (各2. 5 mmo l/U 含dCTP 、dGTP 、dATP 、dTTP 各2 . 5 mmo l/ L 的混合物， - 2 0 'C保存，用,于PCR .,4. 7 日q DNA 聚合酶(5 U/μU ， - 20 'C保存,4.8 2 X 预混液( 2 X Premix Ex Taq) ,4 9 套式PCR 寻 物的目的基因为SWP 基因，对虾肝肠胞虫有很高的特异性，浓度为10μmo l/ L . 序列,如下:,514F,5'-TTG-CAG-AGT-GTT-GTT-AAG-GGT-TT-3' ;,514R, 5 '-CAC-GAT-GTG-TCT-TTG-CAA-TTT-TC-3 , ;,147F, 5'-TTG-GCG-GCA-CAA-TTC-TCA-AAC-A-3';,SC/T 7232-2020,147R, 5' -GCT-GTT-TGT-CTC-CAA-CTG-T A T-TTG-A-3',4. 10 TaqMan 荧光定量PCR 引物和探针的目的基因为SSU rRNA 基因，对肠胞虫属有较好的特异性,但对虾肝肠胞虫的特异性不高，浓度为10μmo l/ L 。序列如下,157F, 5' -AGT-AAA-CTA-TGC-CGA-CAA-3' ;,157R, 5' -AAT-TAA-GCA-GCA-CAA-TCC-3' ;,TaqMan 探针， 5 '-FAM-TCC-TGG-TAG-TGT- CCT←TCC-GT-TAMRA- 3 ' 0,4. 11 矿物泊要求无DNA 酶和RNA 酶，用于元热盖的PCR 扩增仪，还可以降低气溶胶产生的风险,4. 12 分子量标准， DL 2 000 Marker 0,4. 13 琼脂糖,4. 14 抽提液1 ，按附录A 中A.2 的规定执行,4 15 扣l提液JI ，按A. 3 的规定执行,4. 16 TE 缓冲液， 按A.4 的规定执行,4 17 1X TAE 电泳缓冲液:按A.8 的规定执行,4. 18 核酸凝胶染色剂10 mg/ mL 澳化乙键(EB)储存液按A. 10 的规定，或其他EB 替代品,4. 19 组织病理阳性对照受EHP 感染的对虾制成的组织切片,4. 20 组织病理阴性对照: 未受EHP 感染的对虾制成的组织切片,4. 21 套式PCR 和TaqMan 荧光定盘PCR 阳性对照: 为已知EHP 阳性的组织样品DNA 模板，满足,PCR 分析需要. - 20 0C保存,4 . 22 套式PCR 和TaqMan 荧光定量PCR 阴性对照:为已知EHP 阴性的组织样品DNA 模板. -200C,保存,4. 23 套式PCR 和TaqMan 荧光定量PCR 空白对照为无菌双蒸水,5 器材和设备,5. 1 组织病理法所用器材和设备:按照GB/T 28630. 4-2012 中第4 章的规定执行,5. 2 PCR 扩增仪,5. 3 实时荧光定量PCR 仪,5. 4 核酸浓度测定仪,5 5 电泳仪,5. 6 水平电泳糟,5. 7 紫外观察仪或凝胶成像仪,5 8 普通台式高速离心机,5 9 手掌型离心机,5. 10 7J<浴锅或金属浴,5 11 普通冰箱,5. 12 加热设备- 电炉或微波炉等,5 13 微量移液器 盘程O. 1μL- 2.5μL 、O . 5μL-10μL 、2μL-20μL 、20μL-200μL 、100μL- 1000,μL o,5. 14 分析天平.可精确称量到0 . 0001 g 的天平,6 I临床症状,患病对虾肝膜腺和肠道颜色较深，严重者肝膜腺萎缩，生长缓慢，个体明显偏小，感染群体生长差异明,显增大。在正常养殖条件下，摄食正常，肠胃充满食物，不出现大量、急性死亡。体长相同时，发病群体的,平均体重约为EHP 阴性群体的70 % (参见附录B) ,7 采样,7.1 采样对象,SC/T 7232-2020,凡纳滨对虾(Li归户enaeus vannamei) 、斑节对虾(Penaeus monodon) 、日本缝对虾(Marsu户……
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